서 언
재료 및 방법
식물체 준비 및 생육
토마토 뿌리혹선충의 채집, 분리 및 동정
뿌리혹선충 증식
접종원 준비
접종 및 저항성 검정
결과 및 고찰
휴뿌리혹선충의 동정
뿌리혹선충(M. incognita)에 대한 102개 고추 품종의 저항성
접종원 농도에 따른 뿌리혹선충병 저항성 차이
고추의 생육 시기 및 이식 시기에 따른 뿌리혹선충병 저항성 차이
서 언
고추(Capsicum spp.)는 가지과(Solanaceae)에 속하는 식물로 남미가 원산지로 우리나라에 도입된 후 최근 국내 연간 생산량 이 약 30만 톤에 이르는 조미 채소 중에서도 가장 많이 재배되는 대표적인 고소득 작물이다(Yoon et al., 2004; Pae et al., 2005; Kim et al., 2008). 세계적으로 고추는 32종이 알려져 있는데, 이 중 5종(C. annuum, C. chinense, C. frutescens, C. baccatum, C. pubescens)이 재배되고 있으며 식용으로 가장 널리 재배하고 있는 종은 C. annuum이다(Yoon et al., 2004). 조미 채소로서 고 추의 수요는 계속 증가하고 있으며 생식뿐만 아니라 색소, 의약품 등의 원료로도 널리 이용되고 있다(Bosland, 1996). 고소득 작물로 인식되어 고추의 연작재배가 점차 확대되고 있는 추세로 이에 따른 토양 내 병원균의 밀도가 증가하여 고추 재배기간 동안에 다양한 병원균에 노출이 되어 많은 피해를 입고 있는 실정이다(Hwang, 2002). 고추에 발생하는 주요 병해로는 풋마름 병(Ralstonia solanacearum)등의 세균병이 7종, 흰가루병(Laveillula taurica), 탄저병(Colletotrichum spp.), 역병(Phytophthora capsici) 등의 균류병(유사균류병 포함)이 35종, Cucumber mosaic virus(CMV), Pepper mottle virus(PepMoV) 등의 바이러스 병이 16종, 뿌리혹선충병(Meloidogyne spp.)등의 선충병 3종이 보고 되었다(KSPP, 2009).
고추의 뿌리혹선충병은 Meloidogyne incognita, M. arenaria, M. hapla에 의해 발생되는 토양 병해의 하나인데, 시설재배지 의 규모가 대형화 되면서 동일한 장소에서 동일한 작물의 연작 년 수가 길어지고, 연중 재배로 인하여 시설재배지 토양 내 선충 의 밀도가 증가 함에 따라 경제적 피해가 지속적으로 발생하고 있다. 뿌리혹선충병 피해를 감소시키기 위한 방제 방법으로는 침수 및 태양열을 이용한 물리적 방제와 주기적인 토양 개량, 답전윤환, 비주기 작물과의 윤작, 유인식물 재배 등을 이용한 경 종적 방제, 살선충제를 이용한 화학적 방제, 포식성 곰팡이를 이용한 생물학적 방제, 그리고 저항성 품종 재배 등이 알려져 있 다(Heald and Robinson, 1987; Kim and Han, 1988; Park et al., 1995b; Chen et al., 1996; Han and Kim, 1997). 이러한 방제 방법들 중 물리적 방제는 작물, 토양 환경, 재배 조건에 따라 방제효과가 많이 달라지고 높은 비용과 많은 시간이 필요하며, 화 학적 방제는 환경 독성이 크고 토양 내의 잔류 기간이 길어 토양 생태계의 불균형을 유발하여 점차 사용이 감소하고 있다. 환경 과 인체에 미치는 악 영향을 고려하여 천적을 이용한 생물적 방제, 경종적 방제, 저항성 품종 재배 등의 친환경적인 방제 방법 사용이 증가하고 있다(Boina et al., 2008).
저항성 품종이나 저항성 대목을 이용한 접목 재배는 효과가 매우 높으며, 비용이 적게 들고, 장기적인 환경친화적인 방제방 법으로 인식 되고 있다(Rhoades, 1976). 작물에서의 식물기생성 뿌리혹선충 방제와 관련하여 토마토 및 고추 품종의 뿌리혹선 충 저항성 스크리닝을 통한 저항성 작물을 이용한 친환경적 방제 방법에 대한 연구(Han and Kim, 1997; Kim, 2001; Oka et al., 2004; Choi et al., 2006; Kim et al., 2012; Gisbert et al., 2013; Hwang et al., 2014)가 지속적으로 이루어지고 있지만, 강한 저 항성 계통을 가진 품종 및 계통은 많지 않은 것으로 보고되어 있다(Cho et al., 1986; Park et al., 1995a). 따라서 뿌리혹선충에 대한 새로운 저항성 육종 소재의 발굴과 저항성 품종 개발이 요구되고 있으며, 이를 위해서는 대량 검정에 적합한 효율적인 고 추 뿌리혹선충병 저항성 검정 방법이 필요하다.
대다수 선행 연구에서 뿌리혹선충에 대한 저항성 유전자원 및 품종 선발을 위한 저항성 검정을 포장에서 수행하거나, 한 생 육 시기의 고추 유묘에 뿌리혹선충을 한 농도로 접종하여 저항성 품종을 선발하였다(Han and Kim, 1997; Kim, 2001; Oka et al., 2004; Choi et al., 2006; Kim et al., 2012; Gisbert et al., 2013; Hwang et al., 2014). 하지만 뿌리혹선충병에 대해 저항성 정 도가 서로 다른 고추 품종들을 선발하여 다양한 발병 조건에 따른 이들 품종의 저항성 변화를 조사하여 효율적인 고추 뿌리혹 선충병 저항성 검정 방법을 확립한 보고는 없었다.
본 연구는 고추 품종의 뿌리혹선충 M. incognita에 대한 새로운 저항성 육종 소재 개발과 저항성 품종 육성을 위한 효율적인 저항성 검정 방법을 확립하기 위하여 실험하였다. 시판 고추(C. annuum) 품종 102개를 구입하여 M. incognita 뿌리혹선충에 대한 저항성 정도를 조사하였고, 이들로부터 저항성 정도가 다른 6개 고추 품종(‘강력조생건’, ‘신세계’, ‘무한질주’, ‘PR 불로초’, ‘PR 희망찬’, ‘짱’)을 선발하여 접종원 농도, 고추 생육 시기 및 이식 시기 등의 발병 조건에 따른 이들의 뿌리혹선충 M. incognita 에 대한 저항성 차이를 조사하였다.
재료 및 방법
식물체 준비 및 생육
시판 고추 품종들의 M. incognita 뿌리혹선충병에 대한 저항성을 조사하기 위하여 시중으로부터 고추 품종 102개를 구입하 여 실험에 사용하였다(Table 1). 그리고 다양한 조건(접종원 농도, 고추 이식 시기 및 생육 시기)에 따른 뿌리혹선충에 대한 저 항성 차이를 검정하기 위해서는 ‘무한질주’(신젠타종묘), ‘짱’(몬산토코리아), ‘강력조생건’(농우바이오), ‘신세계’(사카타코리 아), ‘PR 불로초’(코레곤), ‘PR 희망찬’(코레곤)의 6개 품종을 사용하여 실험하였다.
고추 종자를 5 × 8 육묘용 연결포트(70 mL/pot, 범농)에 원예용상토 5호(부농)를 채워 넣고 파종하여 온실(25 ± 5℃)에서 21일 동안 재배하였다. 이 고추 유묘를 원예용상토 5호(부농)와 멸균 모래가 혼합된 혼합토양(1:1, v/v)을 채워 넣은 플라스틱 포트(직경 9.0cm, 높이 8.0cm)에 이식하고 온실에서 7일 동안 재배하여 준비한 고추 유묘를 실험에 사용하였다.
고추 품종들의 생육 시기에 따른 뿌리혹선충병 저항성 차이 실험을 위해서는 고추를 앞에서와 동일한 방법으로 파종하고 온 실에서 14, 21, 28, 35일 동안 재배한 유묘를 접종 실험에 사용하였다. 이때 모든 고추 유묘들은 접종 7일 전에 앞에서와 동일한 방법으로 이식하고 온실에서 재배하였다. 그리고 고추 품종들의 이식 시기에 따른 뿌리혹선충병 저항성 차이 실험을 위해서는 접종 9일전, 7일전, 3일전 그리고 접종 직전에 이식한 식물체를 사용하였으며, 모든 처리구의 고추 유묘는 파종 후 28일 동안 재 배한 식물을 실험에 사용하였다.
토마토 뿌리혹선충의 채집, 분리 및 동정
부여 토마토 재배 포장에서 뿌리혹이 발생한 ‘유니콘’ 토마토 품종(뿌리혹선충 저항성 유전자 Mi가 도입된 품종)의 뿌리로 부터 뿌리혹선충을 수집하였다. 혹이 형성된 뿌리를 흐르는 물로 잘 씻어서 뿌리 내의 뿌리혹선충의 알과 유충을 개량된 sodium hyphochloride 방법을 사용하여 분리하였다. 분리 방법은 깨끗이 씻은 뿌리를 1cm 간격으로 잘게 잘라서 200mL의 1% NaOCl 용액이 들어있는 믹서기에 넣고 고속으로 1분간 회전시켰다(Kim and Lee, 2008). 그리고 믹서기 내의 뿌리 찌꺼기, 알, 유충은 75μm와 28μm 체를 통과시키고 28μm 체에 걸린 알을 수확하여 이들이 부화하도록 25℃ 상온에서 배양하였다. 분리한 유충 으로부터 추출한 DNA와M. incognita 특이적인 프라이머 세트인 Sec 1-F(5'-GGGCAAGTAAGGATGCTCTG-3')와 Sec 1-R(5'-GCACCTCTTTCATAGCCACG-3')(Tesarova et al., 2003) 프라이머와 Mi-F(5'-GTGAGGATTCAGCTCCCCAG -3')와 Mi-R(5'-ACGAGGAACATACTTCTCCGTCC-3')(Meng et al., 2004)를 각각 혼합하여 PCR 증폭하였고 산물의 크 기를 1% agarose gel에서 확인하였다(Hwang et al., 2013).
뿌리혹선충 증식
분리한 뿌리혹선충(M. incognita)은 고추보다 토마토에서 뿌리혹선충의 증식이 용이하므로 토마토를 사용하여 증식하였다. 뿌리혹선충에 감수성인 ‘서광’(몬산토코리아) 품종의 토마토 종자를 원예용상토 5호(부농사)에 파종하고 온실(25 ± 5℃)에서 3주 동안 재배한 토마토 유묘를 원예용상토 5호(부농사)와 멸균된 모래의 비율이 1:1(v/v)인 혼합토를 넣은 플라스틱 포트(직 경 10.0cm, 높이 9.0cm)로 이식하고 7일 동안 재배한 후에 뿌리혹선충을 접종하였다. 뿌리혹선충은 포기당 10,000개를 접종하 였으며, 온실에서 통상적인 토마토 재배 방법에 따라4 5-60일 동안 재배하여 M. incognita를 증식하였다.
접종원 준비
혹이 많이 형성된 기주식물의 뿌리를 수거하여 개량된 sodium hypochlorite 방법으로 뿌리혹선충 알을 분리하였다(Barker et al., 1985). 깨끗이 씻은 뿌리를 1cm 이하 간격으로 잘라서 250mL의 0.5% sodium hypochlorite 용액이 들어있는 분쇄기에 넣고 90초간 고속 회전시켰다. 그리고 혼합 용액을 65μm 체에 걸러 뿌리 찌꺼기와 같은 잔여물을 걸러내고 그것을 통과한 알 들은 25μm 체에 수집하여 잔존하는 sodium hypochlorite 성분이 없어지게 수돗물로 충분히 씻어 주었다. 이렇게 수집된 뿌리 혹선충 알의 농도는 해부현미경을 통해 측정하였고 접종원 농도에 따른 조건 실험을 제외한 모든 실험에서는 뿌리혹선충의 알 이 mL 당 5,000개가 되도록 멸균수로 희석하여 접종원을 준비하였다. 그리고 접종원 농도에 따른 고추 품종들의 저항성 차이 실험을 위해서는 뿌리혹선충 알 농도를 mL 당 500개, 1,000개, 5,000개, 10,000개, 30,000개로 조정하여 실험에 사용하였다.
접종 및 저항성 검정
이식하여 재배한 고추 유묘에 준비한 뿌리혹선충 알현탁액을 피펫으로 포기 당 1mL씩 3cm 깊이에 접종하였으며, 접종한 유묘는 온실(25 ± 5℃)에서 관행으로 수분 관리를 하면서 재배하였다. 그리고 고추를 재배하는 동안 1주일 간격으로 에버그린 (N-P-K, 8-4-6; 서울바이오사) 비료를 800배로 희석하여 살포하였다.
선충에서의 저항성은 뿌리혹 형성을 저해하는 것이 아니라 후세대 생산을 억제하는 것으로 정의하고 있다(Trudgill, 1991). 따라서 접종 45일 후에 고추 유묘의 뿌리를 수거해 흙을 제거하고 물로 씻은 후에 뿌리에 형성된 난낭(egg mass)의 수를 조사 하였다. 뿌리혹선충병이 발생한 고추 뿌리를 erioglaucine disodium 용액(15mgㆍL-1)에 30분간 침지하여 염색한 후 뿌리에 형 성된 난낭의 수를 조사하였다(Umesh et al., 1994).
저항성 판정은 감수성 대조구인 ‘PR 희망찬’에 형성된 난낭수와 비교하여 난낭수가 10% 이하이면 저항성(R), 10%초과부터 25%까지는 중도저항성(MR), 25% 초과는 감수성(S)으로 판정하였다(Bridge and Page, 1980; Fassuliotis, 1985).
모든 실험은 10반복으로 2회 수행하였고, SAS(SAS Institute, Inc., 1989, Cary, NC) 프로그램을 이용하여 ANOVA 분석을 하였으며 처리 평균간 비교를 위하여 Duncan's multiple range test(p = 0.05)를 실시하였다.
결과
휴뿌리혹선충의 동정
부여 토마토 재배 포장에서 채집하여 분리한 뿌리혹선충은 M. incognita에 특이적인 프라이머인 Sec 1-F/R과 Mi-F/R을 이용하여 증폭한 결과, 기 보고된 바와 같이 각각 500bp와 1,000bp의 M. incognita에 특이적인 증폭 산물을 보여 본 연구에 사 용한 뿌리혹선충은 M. incognita로 동정되었다(Tesarova et al., 2003; Meng et al., 2004; Hwang et al., 2014).
뿌리혹선충(M. incognita)에 대한 102개 고추 품종의 저항성
시판 중인 고추 품종 102개를 구입하여 M. incognita 뿌리혹선충에 대한 이들 품종간의 저항성 정도를 뿌리에 형성된 난낭 수를 통해 확인하였다(Trudgill, 1991). 파종하고 28일 동안 재배한 고추 유묘에 M. incognita 알을 주당 5,000개씩 접종하고 온 실에서 재배하여 고추 품종들에 형성된 난낭수를 조사하고 가장 난낭수가 많이 형성된 ‘PR 희망찬’을 대조구로 하여 0-13.8개 는 저항성(R), 13.9-34.5개는 중도저항성(MR), 34.6-138개는 감수성(S)으로 판정하였다(Table 1). 고추 시판 품종 102개 중 종 자회사에서 뿌리혹선충병 저항성 품종으로 판매하고 있는 고추 품종은 없었으나, 저항성을 보이는 품종은 ‘PR 신나라’, ‘일등 공신’, ‘강력조생건’, ‘신세계’ 등 44개(43.1%)이었고, 중도저항성을 보이는 품종은 ‘부강’, ‘PR 만세’, ‘오복’, ‘선구자’ 등 18개 (17.6%)였다. 그리고 나머지 40개(39.3%) 품종들은 감수성을 나타냈다(Table 1).
저항성 품종의 육성을 위한 뿌리혹선충(M. arenaria와 M. incognita)에 대한 저항성 고추 유전자원을 뿌리혹선충 이병토에 고추를 재배하여 저항성 반응을 나타내는 ‘Red Chile’, ‘Santanka’, ‘Nemaheart’ 등의 품종을 보고하였다(Hare, 1956, 1957; Di Vito and Saccardo, 1979). 그리고 2013년 Gisbert et al.은 뿌리혹선충(M. incognita)이 발생한 포장에 고추 유전자원 C. annuum (29개), C. chinense (9개), C. frutescens (4개), C. pubescens (1개)의 유묘를 정식하여 저항성을 검정한 결과, 고도 저항성을 나 타내는 C. frutescens 3종과 C. annuum 7종을 보고하였다.
국내에서는 뿌리혹선충(M. hapla)이 100g 당 400마리가 함유된 사질양토에 종자를 10립씩 파종하여 접종하고 그리고 종 자 발아 3주 후에 다시 한 번 2령 유충을 관수하여 접종하고 gall index로 발병 정도를 조사하여 실험한 46개 고추 품종 중 중간 저항성 품종으로 ‘임실’, ‘밀양극조생’ 및 ‘Riogrande’을 보고하였다(Cho et al., 1986). 그리고 Han and Kim(1997)은 고추 종자 를 발아시키고 이식하여 5-7일 재배한 고추묘에 뿌리혹선충(M. incognita)의 2령 유충을 포트 당 100마리씩을 접종하여 유전 자원 및 재배 품종의 M. hapla에 대한 저항성을 조사한 결과, 국내 유전자원 15개와 국외 도입종 2개는 저항성이었으며, 재배 품종으로는 ‘부강’ 등 4개 품종이 중도저항성을 보였다고 하였다. 한편 Kim et al.(2012)은 국내 시판 중인 92개 고추 품종들의 M. arenaria와 M. incognita에 대한 저항성 검정을 포장에 존재하는 뿌리혹선충 유충을 채집하여 토양 100 mL 당 300마리씩 접종하여 이병토를 만들고 이를 직경 10cm 포트에 넣고 8주 동안 재배한 고추 유묘를 이식하여 실험한 결과, 실험한 모든 품종 은 M. arenaria에 대해 저항성을 나타내었으며 M. incognita에는 감수성이었다고 보고하였다.
하지만 본 연구에서는 실험한 102개 품종 중 43%에 해당하는 44개 품종이 저항성을 보였으며, 이들 중 ‘배로따’와 ‘일송정’ 은 Kim et al.(2012)에 의해 감수성으로 보고된 품종이었다. 이것은 우리나라에 존재하는 M. incognita 선충 간에 저항성에 대 한 차이가 있는 즉 선충의 race 분화로 인한 결과일 수도 있으나 이는 추후에 확인이 필요하다. 한편, 44개 저항성 품종 중 뿌리 에 난낭이 전혀 형성되지 않은 ‘PR 열정’, ‘왕건’, ‘안전벨트’ 및 ‘강력태양’ 등은 M. incognita 뿌리혹선충병에 대해 고도의 저항 성을 나타내는 우수한 품종임을 알 수 있었다(Table 1).
고추에서 뿌리혹선충 저항성과 관련되는 여러 우성 유전자들이 알려졌으며 그러한 저항성 유전자들은 유전자 상호작용의 속성 속에 독립적인 유전자로 기능 할 것으로 생각 되었다(Hare 1956; Djian-Caporalino et al., 1999, 2001). 뿌리혹선충 저항 성과 관련되는 6개(Me1, Me3, Me4, Me7, Mech1 및 Mech2)의 유전자가 발견되었고 서로 다른 고추 품종에서 Me 유전자로 명 명되었다. 그 중 Me1, Me3 및 Me7 유전자는 여러 선충들에서 다양한 저항성 반응을 나타냄(Djian-Caporalino et al., 1999)에 따라 선충 종의 넓은 범위에 대해 효과적인 저항성 반응을 보이는 것으로 밝혀졌다(Pegard et al., 2005). AFLP(Amplified Fragment Length Polymorphism) 기법을 통해서 6개의 저항성 유전자들은 고추 게놈 염색체 P9의 28cM 구간 내에 군집되는 것으로 밝혀졌다(Lefebvre et al., 2002; Djian-Caporalino et al., 2007). 또한, Hare(1957)에 의해 Me 저항성 유전자와는 다른 저항성 N 유전자가 보고 되었고, 대립형질 실험을 통해 N과 Me3 유전자는 서로 구별할 수 있는 뿌리혹선충 저항성 유전자임 을 알 수 있었다(Thies and Ariss, 2009). 한편, 고추 유전체 내의 뿌리혹선충 저항성 유전자 군집에 대한 여러 연구가 이루어지 고 있지만, 아직 정확한 저항성 유전자의 분석과 역할에 대해서는 보고 되어 있지 않다
한편 발병 조건에 따른 고추 품종들의 뿌리혹선충병 저항성 차이 실험을 위하여 Table 1의 결과에 따라 저항성 2개 품종(‘강력 조생건’, ‘신세계’), 중도저항성 2개 품종(‘무한질주’, ‘PR 불로초’), 감수성 2개 품종(‘PR 희망찬’, ‘짱’)을 선발하였다.
접종원 농도에 따른 뿌리혹선충병 저항성 차이
선발한 6개 고추 품종의 뿌리혹선충 접종원(알) 농도에 따른 저항성 차이를 조사하기 위하여 온실에서 28일 동안 재배한 고 추 유묘에 M. incognita의 알을 주 당 500개, 1,000개, 5,000개, 10,000개 및 30,000개씩 접종하고 각 고추 유묘에 형성된 난낭 (egg mass)의 수를 조사한 결과, 실험한 6개 고추 품종들에 형성된 난낭수는 접종원의 농도가 증가함에 따라 증가하였다(Table 2). 하지만 증가 정도는 품종에 따라 차이가 있었는데 감수성 품종인 ‘PR 희망찬’과 ‘짱’에서는 각각 181개와 248개가 증가하였 으나, 저항성 품종인 ‘강력조생건’과 ‘신세계’에서는 각각 14개와 12개가 증가하였으며, 중도저항성 품종인 ‘무한질주’와 ‘PR 불 로초’에서는 중간 정도인 43개가 증가하였다.
이를 각 접종원 농도별로 감수성 대조품종인 ‘PR 희망찬’과 비교하여 각 품종들의저항성 반응을 조사해 본 결과, 주 당 500 개와 1,000개의 알을 접종한 경우를 제외하면 실험한 모든 접종 농도(5,000, 10,000, 30,000개/주)에서 저항성 품종들과 중도 저항성 품종들은 각각 저항성과 중도저항성 반응을 보였고, ‘PR 희망찬’ 및 ‘짱’ 품종은 감수성 반응을 나타냈다(Table 2). 하지 만 주 당 500개 접종하였을 때에는 저항성과 중도저항성 품종들간에 저항성 차이가 없이 모두 저항성 이었으며, 주 당 1,000개 를 접종하였을 때에는 저항성 품종은 저항성이었으나 중도저항성 품종들은 감수성 반응을 보였다 .
따라서 뿌리혹선충 접종원 준비를 고려할 때 효율적인 고추의 뿌리혹선충병 저항성 검정에 적합한 접종원의 농도는 주 당 5,000개의 M. incognita 알을 접종하는 것이라고 생각되었다(Table 2).
고추의 생육 시기 및 이식 시기에 따른 뿌리혹선충병 저항성 차이
저항성 정도가 다른 6개 고추 품종을 14, 21, 28 및 35일 동안 재배한 고추 유묘에 M. incognita 알을 주당 5,000개씩 접 종하고 고추 품종들의 생육시기에 따른 뿌리혹선충병 저항성 차이를 조사한 결과, 감수성 품종(‘PR 희망찬’, ‘짱’)에 형 성된 난낭수는 실험한 고추의 생육 시기와 관계없이 119-132개의 난낭이 형성되었고, 저항성 품종(‘강력조생건’, ‘신세 계’)과 중도저항성 품종(‘무한질주’, ‘PR 불로초’)도 고추 유묘의 생육 시기와 관계없이 각각 6-9개와 23-32개의 난낭이 형성되었다(Table 3).
고추의 생육 시기별로 감수성 대조품종인 ‘PR 희망찬’과 비교하여 나머지 5개 품종의 저항성 반응을 조사한 결과, 실 험한 6개 고추 품종들은 고추 유묘의 생육 시기에 관계없이 저항성 품종은 저항성을, 중도저항성 품종은 중도저항성을 그리고 감수성 품종은 감수성을 잘 나타내었다(Table 3). 따라서 고추의 생육 시기에 따른 M. incognita의 뿌리혹선충병 에 대한 저항성은 파종 후 2, 3, 4, 5주 등 실험한 고추 유묘의 생육 시기에 의해서 거의 영향을 받지 않는다고 생각되었 다.
한편, 고추 유묘의 이식 후 접종 전까지 재배하는 시간 즉 이식 후 뿌리의 발근 정도에 따른 고추 품종들의 M. incognita 뿌리혹선충병에 대한 저항성 차이를 조사하기 위하여 M. incognita를 접종하기 0, 3, 7 및 9일 전에 고추 유묘를 이식하여 실험한 결과, 각 이식 시기에서 감수성 대조 품종인 ‘PR 희망찬’의 난낭수와 비교하여 나머지 5개 품종의 저항성 반응을 결정하면 이식 시기에 따라 상이한 반응을 나타냈다(Table 4). 이식 7일 및 9일 후에 접종하였을 때에는 저항성(‘강력조 생건’, ‘신세계’), 중도저항성(‘무한질주’, ‘PR 불로초’) 및 감수성 품종(‘PR 희망찬’, ‘짱’)들은 감수성 대조구인 ‘PR 희망 찬’에 형성된 난낭 수와 비교하였을 때 각각 저항성, 중도저항성 및 감수성 반응을 보였다. 하지만 접종하기 직전에 이식 한 경우에는 저항성 품종들은 저항성 반응을 보였으나, 중도저항성 품종들이 모두 감수성 반응을 나타냈다. 그리고 이식 3일 후에 접종하였을 경우에는 저항성과 중도저항성 품종들이 모두 중도저항성을 보였다. 이는 이식과정에서 생긴 뿌리 상처가 저항성에 영향을 미친 결과로 생각되었다. 따라서 이식에 의한 상처는 치유되고 뿌리혹선충이 침입하기 용이한 세근이 충분히 발달한 시기인 이식 후 7-9일 재배한 고추 유묘에 뿌리혹선충을 접종하는 것이 가장 효과적인 방법으로 생각되었다.
이상의 결과들로부터 효율적인 고추의 뿌리혹선충병 저항성 검정을 위해서는 온실(25 ± 5℃)에서 원예용 상토에 파 종하고 약 21일 동안 재배한 고추 유묘를 모래와 원예용 상토를 동량(v/v)으로 혼합한 토양에 이식하고 온실에서 7일 동 안 재배한 후에 주 당 5,000개의 M. incognita 알을 접종하고 45-60일 후에 고추 뿌리에 형성된 난낭의 수를 조사하는 방 법을 제안하고자 한다.


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